A preparação de amostras para análise SEM (Microscopia Eletrónica de Varrimento) envolve vários passos críticos para garantir que a amostra está devidamente preservada e pronta para a obtenção de imagens detalhadas.
7 passos essenciais a seguir
1. Fixação primária com aldeídos
Este passo envolve a fixação das proteínas na amostra utilizando aldeídos. Os aldeídos ajudam a preservar a estrutura das proteínas e a evitar a degradação.
2. Fixação secundária com tetróxido de ósmio
Após a fixação primária, a amostra é sujeita a uma fixação secundária com tetróxido de ósmio. Este passo ajuda a fixar os lípidos na amostra e proporciona contraste para a obtenção de imagens.
3. Série de desidratação com solvente
A amostra é então desidratada utilizando uma série de solventes, como o etanol ou a acetona. A desidratação remove a água da amostra e prepara-a para a secagem.
4. Secagem
Uma vez desidratada, a amostra deve ser seca. Isto pode ser feito utilizando vários métodos, como a secagem em ponto crítico, a liofilização ou simplesmente a secagem ao ar. O objetivo é remover todos os vestígios de solvente da amostra.
5. Montagem num suporte
A amostra seca é então montada num suporte, que é um pequeno cilindro ou disco de metal. O stub fornece uma plataforma estável para a amostra durante a aquisição de imagens.
6. Revestimento por pulverização catódica com material condutor
Para evitar o carregamento e melhorar a condutividade, a amostra é revestida com uma fina camada de material condutor, como ouro ou carbono, utilizando um revestimento por pulverização catódica. Este revestimento assegura que o feixe de electrões pode interagir corretamente com a amostra durante a análise SEM.
7. Consultar as diretrizes do fabricante do instrumento
É importante notar que as técnicas específicas de preparação de amostras podem variar consoante a natureza da amostra e os requisitos específicos da análise SEM. Por isso, é essencial consultar as diretrizes e protocolos do fabricante do instrumento para a preparação da amostra.
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