A temperatura a que um rotovap deve ser operado varia tipicamente em torno dos 50°C, especialmente quando utilizado em conjunto com um vácuo profundo. Esta definição de temperatura é crucial para uma evaporação eficiente sem danificar a amostra, especialmente quando se trata de componentes delicados como péptidos ou proteínas.
Explicação da definição da temperatura:
A escolha de 50°C é estratégica porque equilibra a necessidade de calor suficiente para facilitar a evaporação com a necessidade de evitar o sobreaquecimento de materiais sensíveis. Sob um vácuo profundo, o ponto de ebulição dos solventes é significativamente reduzido, permitindo-lhes evaporar a temperaturas mais baixas do que o fariam sob pressão atmosférica normal. Isto é particularmente importante quando a amostra inclui moléculas biológicas delicadas que podem desnaturar ou degradar-se a temperaturas mais elevadas.Papel do vácuo:
- O vácuo profundo é essencial para baixar o ponto de ebulição dos solventes, o que, por sua vez, permite o funcionamento a temperaturas mais baixas. As fontes de vácuo tradicionais, como as bombas peristálticas ou os aspiradores, são insuficientes para este fim, uma vez que não conseguem atingir as baixas pressões (na gama dos mTorr) necessárias para um funcionamento eficaz do rotovap. Por conseguinte, recomenda-se a utilização de uma bomba de vácuo robusta capaz de atingir estas baixas pressões.Passos operacionais:
- Arranque da bomba de vácuo: Começar por ligar a bomba de vácuo e deixar que esta se retire durante alguns minutos antes de injetar a amostra. Esta configuração inicial do vácuo garante que o sistema está pronto a funcionar.
- Preparar o Rotovap: Quando o vácuo estiver estável e apresentar uma leitura baixa, injetar um pequeno volume (20% do total) do líquido na válvula rotovap. O processo de evaporação inicia-se à medida que a temperatura do chiller sobe ligeiramente.
Ajustar a injeção: Monitorizar a temperatura; assim que estabilizar ou começar a descer, abrir lentamente a válvula de injeção para introduzir mais líquido no balão rotativo. O objetivo é fazer corresponder as taxas de entrada e saída para manter um processo estável.
Conclusão:
