Conhecimentos básicos experimentais
Visão geral do hemocitómetro
O hemocitómetro, especificamente o modelo XB-K-25, é um instrumento de precisão concebido para a contagem de células.Este dispositivo está dividido em 25 compartimentos distintos, cada um servindo como uma área crítica para uma contagem precisa de células.Toda a área de contagem do Hemocitómetro abrange 1 mm², proporcionando uma plataforma normalizada para medições consistentes.Dentro desta área de 1 mm², cada pequeno quadrado ocupa uma área de 1/400 mm², assegurando que as contagens de células são precisas e reprodutíveis.
Para compreender melhor a estrutura e a função do Hemocitómetro, considere a seguinte análise:
| Caraterística | Descrição |
|---|---|
| Área de contagem total | 1mm² |
| Número de compartimentos | 25 |
| Área de cada quadrado | 1/400mm² |
Esta conceção permite aos investigadores contar células com elevada precisão, tornando-a uma ferramenta essencial em várias aplicações biológicas e médicas.
Passos para a contagem
Preparação da placa de contagem de células
Para garantir uma contagem de células precisa, é crucial uma preparação meticulosa do hemocitómetro.Comece por limpar cuidadosamente a placa de contagem com etanol a 75% para eliminar quaisquer potenciais contaminantes.Este passo é essencial, uma vez que mesmo resíduos mínimos podem interferir com a exatidão da contagem.
Em seguida, colocar cuidadosamente a lamela sobre a placa de contagem.A lamela deve ser posicionada com precisão para garantir que assenta uniformemente nas ranhuras, criando uma câmara uniforme para a suspensão de células.Qualquer desalinhamento pode levar a uma distribuição desigual das células, distorcendo assim a contagem.
Quando a lamela estiver colocada, transferir a placa de contagem para uma mesa ultra-limpa.Este ambiente está isento de poeiras e outras partículas que possam comprometer a integridade da suspensão de células.A mesa ultraclean proporciona um ambiente controlado onde os passos subsequentes da preparação e contagem da suspensão de células podem ser efectuados com um risco mínimo de contaminação.
Seguindo estes passos meticulosos, estabelece as bases para contagens de células precisas e fiáveis, assegurando que os seus dados experimentais são exactos e reproduzíveis.
Preparação da suspensão de células
Para preparar a suspensão de células para contagem, o primeiro passo envolve a digestão das células para garantir que estão num estado adequado para análise.Este processo requer normalmente a utilização de enzimas ou outros reagentes que quebram a matriz extracelular, libertando as células das suas ligações.Quando as células estiverem adequadamente digeridas, é extraído um volume exato da suspensão.É prática comum retirar entre 50 a 100 microlitros da suspensão de células, assegurando que a amostra não é demasiado diluída nem demasiado concentrada, o que poderia afetar a precisão da contagem.
Depois de obter o volume necessário, a suspensão é cuidadosamente sifonada para as células de contagem designadas no hemocitómetro.Este passo exige precisão e cuidado para evitar a introdução de bolhas de ar ou o derrame da suspensão, o que poderia comprometer o processo de contagem.O hemocitómetro, com a sua grelha estruturada, foi concebido para facilitar a contagem exacta das células, proporcionando uma área padronizada para a contagem.
Em resumo, a preparação da suspensão de células é uma etapa crítica que prepara o terreno para uma contagem exacta das células.Ao digerir cuidadosamente as células e ao transferir com precisão a suspensão, os investigadores asseguram que os passos de contagem subsequentes se baseiam numa amostra fiável e representativa.
Placa de contagem de células ao microscópio
Ao examinar a placa de contagem de células ao microscópio, a estrutura torna-se evidente.A placa é meticulosamente dividida em duas células de contagem distintas por uma ranhura em forma de H, cada uma contendo 9 quadrados grandes.O quadrado central grande dentro de cada célula de contagem é subdividido em 25 quadrados médios, criando um padrão em forma de grelha que facilita a contagem precisa das células.Este design garante que as células podem ser enumeradas com precisão, fornecendo dados cruciais para determinar a densidade e a viabilidade das células em várias experiências biológicas.
Métodos de contagem
Ao efetuar a contagem de células com um hemocitómetro, são utilizados dois métodos principais: contagem de células em quadrados grandes e em quadrados médios.Cada método oferece uma abordagem distinta para determinar com exatidão a densidade das suspensões de células.
Método dos quadrados grandes
Neste método, utiliza-se para a contagem o quadrado central grande, que é depois dividido em 25 quadrados médios.A fórmula para calcular a densidade da suspensão de células é a seguinte:
[ \text{Densidade celular} = \frac{\text{Total de células contadas}}{\text{Volume do quadrado grande}}]
O volume do quadrado grande é normalmente de 1 mm³, o que torna o cálculo simples e exato.
Método dos quadrados médios
Em alternativa, o método dos quadrados médios envolve a contagem de células dentro dos 25 quadrados médios que compõem o quadrado central grande.Este método fornece uma contagem mais pormenorizada, especialmente útil para suspensões com densidades celulares variáveis.A fórmula para a densidade da suspensão de células utilizando este método é:
[ \text{Densidade celular} = \frac{\text{Total de células contadas em 25 quadrados de meio}}{\text{Volume de 25 quadrados de meio}}]
O volume de cada quadrado de meio é 1/25 mm³, garantindo um elevado nível de exatidão no cálculo da densidade celular.
Ao utilizar estes métodos, os investigadores podem determinar eficazmente a concentração de células numa determinada suspensão, facilitando a obtenção de resultados experimentais exactos e a reprodutibilidade.
Limpeza da placa de contagem de células
A limpeza adequada da placa de contagem de células é crucial para manter a sua precisão e longevidade.Após cada utilização, a placa deve ser meticulosamente limpa para remover quaisquer resíduos de células ou contaminantes.Comece por enxaguar a placa de contagem com etanol a 75%, assegurando-se de que todas as superfícies ficam completamente embebidas.Este passo ajuda a desinfetar a placa e a eliminar qualquer matéria orgânica que possa interferir com futuras contagens de células.
Após a aplicação do etanol, é essencial secar a placa com um pano ou tecido que não largue pêlos.Isto evita que o etanol remanescente se acumule na superfície, o que poderia danificar as delicadas microestruturas da grelha de contagem.Após a secagem, a placa deve ser armazenada num ambiente limpo e sem pó, normalmente numa caixa de armazenamento específica.Isto assegura que a placa permanece protegida do pó e de outras partículas transportadas pelo ar quando não está a ser utilizada.
É importante notar que, embora o álcool seja um agente de limpeza eficaz, não deve ser utilizado em excesso.Evite mergulhar a placa de contagem em álcool por períodos prolongados, pois isso pode levar à degradação dos materiais da placa ao longo do tempo.Em vez disso, utilize uma abordagem suave e controlada para garantir que a placa é higienicamente limpa sem causar desgaste desnecessário.
Ao seguir estes protocolos de limpeza, pode garantir que a sua placa de contagem de células permanece em condições óptimas, fornecendo resultados fiáveis para todas as suas experiências de contagem de células.
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